尼基塔（Maggie Q扮演）曾经是一个性格叛逆、野性难驯的少女，因为犯下重罪，被联邦法院处以死刑。一家秘密间谍机构从死囚大牢中将尼基塔救出来，伪造了她的死亡，给予她“重生”的机会。没人知道这家间谍机构的真实来历，只知道它被称作“组织”（Division）。“组织”告诉尼基塔：要想活命，她就必须为她的祖国效命。但是他们没有告诉尼基塔，她将被训练成一个间谍、一个刺客。

在最关键的时刻，“组织”出卖了尼基塔。尼基塔这才发现，她自认为这世界上唯一可以相信的人竟然一直在欺骗她，她伤心欲绝于是她离开了组织。在躲藏了三年之后，尼基塔突然重现江湖，向以前的雇主展开无情的报复——她决心不惜一切代价揭发他们的阴谋，彻底摧毁这个秘密组织。

组织并不会坐以待毙，当尼基塔离开后，他们便招募了一批新人，将他们训练成顶级杀手。其中，夏恩·韦斯特（Shane West）饰演的迈克尔（Michael）是组织中专门负责追捕尼基塔小组的负责人，这个小组中除了他之外，还有梅琳达·克拉克（Melinda Clarke）扮演的阿曼达（Amanda），她专门负责利用女性种种优势勾引敌人；亚伦·斯坦福（Aaron Stanford）扮演小组里的伯克霍夫（Birkhoff），他是一个热爱功能饮料和马铃薯片的计算机专家。另外，山德·贝克利（Xander Berkeley）饰演组织负责人珀西（Percy）。